避坑指南!PCR實(shí)驗(yàn)的污染來(lái)源都有哪些?負(fù)壓實(shí)驗(yàn)環(huán)境會(huì)對(duì)健康帶來(lái)危害嗎?
PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱(chēng)。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級(jí)別。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有哪些問(wèn)題需要注意的,一起來(lái)看看吧~
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PCR實(shí)驗(yàn)室的污染來(lái)源
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樣本間交叉感
收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴(yán)導(dǎo)致外溢;不同樣本移液時(shí)忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖;移液器等實(shí)驗(yàn)器具及耗材未及時(shí)消毒滅菌;不同樣本同時(shí)開(kāi)蓋或樣本劇烈震蕩、反復(fù)吹吸導(dǎo)致氣溶膠形成擴(kuò)散,相互交叉污染。
實(shí)驗(yàn)試劑污染
主要是在 PCR 組分試劑加樣過(guò)程中,由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。加樣過(guò)程中,因?yàn)镻CR試劑對(duì)溫度十分敏感,需要通過(guò)冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0℃,但這個(gè)過(guò)程也充滿(mǎn)污染風(fēng)險(xiǎn)。
擴(kuò)增產(chǎn)物污染
大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴(kuò)增后的PCR反應(yīng)管意外開(kāi)蓋,這是PCR反應(yīng)中最主要、最常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可形成假陽(yáng)性。
克隆質(zhì)粒污染
作為陽(yáng)性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
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PCR實(shí)驗(yàn)室污染應(yīng)急處理方法
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若核酸樣本溢出
立即用布或紙巾覆蓋,由外圍向中心傾倒10%的次氯酸消毒劑,約30分鐘后,清除污染物品,再用次氯酸消毒劑擦拭,并用75%酒精噴灑,移動(dòng)紫外車(chē)定點(diǎn)照射1小時(shí)。
其他不明情況污染
1、暫停所有實(shí)驗(yàn)操作;
2、清理實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有物品,尋找污染來(lái)源;
3、加大實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng);
4、對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有表面(臺(tái)面、地面及墻面) 進(jìn)行消毒;
5、75%酒精空中噴霧;
6、開(kāi)啟紫外消毒裝置,延長(zhǎng)紫外照射時(shí)間(4小時(shí)以上);
7、以上措施每日進(jìn)行,直至污染消除;用新試劑及確認(rèn)無(wú)污染的器材進(jìn)行原污染項(xiàng)目的試劑空白檢測(cè),連續(xù)3次均陰性后方可進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。
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PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的職業(yè)危害
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充滿(mǎn)負(fù)壓、噪音、病毒的PCR實(shí)驗(yàn)室到底有沒(méi)有職業(yè)危害這個(gè)問(wèn)題?
負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室,是檢測(cè)病毒樣本的最基本條件。所謂負(fù)壓,就是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)氣壓比實(shí)驗(yàn)室外環(huán)境的正常氣壓要低,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外產(chǎn)生一定的壓力差,從而控制氣體流動(dòng)的方向,保證氣流從實(shí)驗(yàn)室外流向?qū)嶒?yàn)室內(nèi),負(fù)壓能確保室內(nèi)空氣不會(huì)泄漏出去造成污染,可以有效地保護(hù)環(huán)境。
但是負(fù)壓實(shí)驗(yàn)室環(huán)境會(huì)不會(huì)對(duì)人體會(huì)造成傷害呢?搜遍現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料,所有論點(diǎn)都是強(qiáng)調(diào)對(duì)環(huán)境的安全性,對(duì)于在負(fù)壓環(huán)境下的人有沒(méi)有影響這個(gè)問(wèn)題,并沒(méi)有一篇文章提及,更別說(shuō)進(jìn)行科學(xué)詳細(xì)的論述。
但沒(méi)提及的事情不等于不存在,或許這是從業(yè)人員面臨的一種新型的職業(yè)危害,有些危害可能已經(jīng)出現(xiàn)了,可有些危害一時(shí)還不易被工作人員察覺(jué),但實(shí)際從事該工作的工作者應(yīng)當(dāng)給予重視。
你認(rèn)為
負(fù)壓實(shí)驗(yàn)環(huán)境會(huì)對(duì)健康帶來(lái)危害嗎
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